人多发性骨髓瘤细胞 （MM.1R） 细胞描述 该细胞系的母细胞株MM.1是从一位对类固醇疗法产生抗药性的多发性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R对地塞米松耐药。近缘细胞系MM.1S也是从MM.1中分离出来的，但对地塞米松敏感。该细胞复苏后需要两周左右才能恢复正常生长。 细胞特性 1）来源：人、女性、外周血 2）形态：成淋巴瘤细胞，悬浮和轻微的贴壁同时存在 3）含量：>1x106 细胞数 4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 5）用途：仅供科研使用。 运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 细胞接收后的处理： 1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。 2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。 4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。??收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。 细胞培养步骤 一．培养基及培养冻存条件准备： 1）准备1640（推荐：BWM-0002）培养基,优质胎牛血清10 %，P/S青霉素-链霉素 1% 2）注意事项： a.该细胞同时存在悬浮生长和轻微的贴壁状态。 b.该细胞复苏后需培养2周左右时间，才能恢复正常生长状态。 c.细胞密度不可过高，在细胞汇合前进行传代，过度融合生长细胞容易产生死细胞团。 3）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 4）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二．细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。 该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法： 该细胞是一种混合生长的细胞；细胞既可以以轻度附着的单层形式生长，也可以以悬浮液形式生长。可以通过添加新鲜培养基来维持培养。或者，可以通过将贴壁细胞用细胞刮铲刮入含有漂浮细胞的培养基中，通过离心收集细胞，将细胞沉淀重悬于新鲜培养基中并分配到新的培养瓶中来对细胞进行传代。建议收货后的第一次传代密度为1:2进行。后续的传代可根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。 3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例； 1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 注意事项： 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。