人类胚胎干细胞H1 细胞名称：H1 细胞描述：人胚胎干细胞，曾用名WA01 形 态：球形克隆，贴壁生长 来源性别：男性 组织：内细胞团 冻存日期/代数：详见 冻存管/培养瓶 标识 建议复苏培养体系：1 个 T25 培养瓶或6cm培养皿 细胞状态：良好 支原体检测结果：阴性 细胞用途：仅供科研使用。 STR鉴定结果： D5S818 9 11 D13S317 8 11 D7S820 8 12 D16S539 9 13 VWA 15 17 TH01 9.3 13 AMEL X Y TPOX 8 8 CSF1PO 12 13 H1细胞完全培养基培养人胚胎干细胞 1.试剂和材料 H1细胞完全培养基试剂盒 成分 规格 数量 储存条件 H1细胞基础培养基 500mL 1瓶 2-8℃ H1细胞培养基添加剂 20ml 1支 -20℃ 所需的其它试剂和材料 产品 规格 货号 品牌 Y27632 1mg H1Med-BWM-CA005 BWM Matrix 5mL H1Med-BWM-CA004 BWM H1细胞消化液 500mL H1Med-BWM-CA003 BWM 另需细胞培养皿/瓶/板，15mL离心管和移液管等细胞培养耗材 2.培养流程 2.1.复苏 在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。 1.将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。 2.使用移液管将冻存管中含有H9细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。 3.室温300g离心5min。 4.吸出培养基，确保细胞团完整。 5.然后缓慢加入1mL完全培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。 6.轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。 7.将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。 2.2.传代 当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。 1.传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。 2.吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。 3.加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。 4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。 5.加入适量的完全培养基终止消化。 6.移入离心管，300g离心5min， 7.离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。 8.传代比例为 1：6—1：8，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。 9.将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。 2.3.冻存 当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。 1.传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。 2.吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。 3.加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。 4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。 5.加入适量的完全培养基终止消化。 6.移入离心管，300g离心5min。 7.离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。 8.使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团，然后将细胞悬液转移至冻存管，冻存按 6 孔板每孔冻 1 支，6cm 皿冻 2-4 支，10cm 皿冻 6-12 支（冻存液为：90%H9细胞完全培养基与 10%的DMSO。